分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù)
定 價(jià):39 元
叢書名:普通高等教育“十二五”規(guī)劃教材
- 作者:任林柱, 張英主編
- 出版時(shí)間:2015/5/1
- ISBN:9787030449269
- 出 版 社:科學(xué)出版社
- 中圖法分類:Q7-33
- 頁(yè)碼:200
- 紙張:膠版紙
- 版次:1
- 開本:16K
本書共列三十個(gè)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)及其相關(guān)附錄, 內(nèi)容不僅涵蓋了基因克隆、基因表達(dá)、核酸及蛋白分子雜交等分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn), 也包括基因檢測(cè)、基因打靶、RNA干擾、蛋白分析等新型的分子生物學(xué)技術(shù)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)包括原理介紹、實(shí)驗(yàn)操作、常見問(wèn)題及注意事項(xiàng)。
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《分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù)實(shí)驗(yàn)》可用于高等院校生物、醫(yī)藥學(xué)科各專業(yè)本科生和研究生的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教材,同時(shí)也可作為從事相關(guān)領(lǐng)域的教學(xué)、科研人員的一本有益的參考書。
目錄
前言
實(shí)驗(yàn)一 DNA的提取 1
實(shí)驗(yàn)二 核酸的定量 8
實(shí)驗(yàn)三 真核細(xì)胞總RNA的提取 11
實(shí)驗(yàn)四 PCR擴(kuò)增目的基因 17
實(shí)驗(yàn)五 RT-PCR 25
實(shí)驗(yàn)六 DNA瓊脂糖凝膠電泳 31
實(shí)驗(yàn)七 從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段 36
實(shí)驗(yàn)八 目的基因片段與載體的連接 39
實(shí)驗(yàn)九 用氯化鈣法制備新鮮的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞 42
實(shí)驗(yàn)十 重組DNA的轉(zhuǎn)化 44
實(shí)驗(yàn)十 DNA酶切 48
實(shí)驗(yàn)十二 轉(zhuǎn)化克隆的篩選和鑒定 52
實(shí)驗(yàn)十三 質(zhì)粒DNA的分離純化 55
實(shí)驗(yàn)十四 含甘油培養(yǎng)物保藏法 65
實(shí)驗(yàn)十五 Southern blot分析 67
實(shí)驗(yàn)十六 Northern blot分析 74
實(shí)驗(yàn)十七 實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù) 78
實(shí)驗(yàn)十八 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù) 87
實(shí)驗(yàn)十九 mRNA差異顯示技術(shù) 93
實(shí)驗(yàn)二十 外源基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá) 97
實(shí)驗(yàn)二十一 SDS-PAGE檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá) 100
實(shí)驗(yàn)二十二 Western blot檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá) 107
實(shí)驗(yàn)二十三 雙向電泳技術(shù) 114
實(shí)驗(yàn)二十四 DNA甲基化的檢測(cè) 138
實(shí)驗(yàn)二十五 哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的RNA干擾技術(shù) 141
實(shí)驗(yàn)二十六 小鼠血漿microRNA提取技術(shù) 144
實(shí)驗(yàn)二十七 DNA芯片技術(shù)檢測(cè)病原 147
實(shí)驗(yàn)二十八 TALEN載體的設(shè)計(jì)與構(gòu)建 149
實(shí)驗(yàn)二十九 TALEN定點(diǎn)制備及篩選突變體 155
實(shí)驗(yàn)三十 CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因組定點(diǎn)編輯技術(shù) 157
主要參考文獻(xiàn) 163
附錄 166
實(shí)驗(yàn)一DNA的提取
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?nbsp;
了解DNA提取的基本原理,掌握DNA的提取方法
【實(shí)驗(yàn)原理】
遺傳信息全部?jī)?chǔ)存在DNA -級(jí)結(jié)構(gòu)之中,制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質(zhì)脂類和糖類等分離,又要保持DNA分子的完整
一分離純化DNA的原則
(l)保持DNA分子一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性溫度不要過(guò)高;控制一定的pH范圍(pH5~9),保持一定的離子強(qiáng)度,減少物理因素對(duì)核酸降解的機(jī)械剪切力
(2)防止DNA的生物降解細(xì)胞內(nèi)或外來(lái)的各種核酸酶能消化核酸鏈中的磷酸二酯鍵,破壞核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)因此,所用器械和一些試劑需要高溫滅菌,提取緩沖液中也需要加核酸酶抑制劑
二分離提取核酸的主要步驟