《分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》以高效表達(dá)鼠源的GAPDH蛋白為例,從RNA的提取、定性與定量、CDNA的合成、表達(dá)載體的克隆、轉(zhuǎn)染與表達(dá),以及對(duì)蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)與鑒定等設(shè)計(jì)了一系列相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)。每一個(gè)實(shí)驗(yàn)既簡(jiǎn)明扼要地介紹相關(guān)理論,詳細(xì)描述實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程,還包括完成該實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能存在的問(wèn)題。每個(gè)實(shí)驗(yàn)后均展示了理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。與書(shū)配套的數(shù)字課程提供各實(shí)驗(yàn)的教學(xué)課件,為教師備課和學(xué)生課前預(yù)習(xí)提供參考!斗肿由飳W(xué)實(shí)驗(yàn)教程》具有明確的思路和完整的內(nèi)容,對(duì)生物學(xué)、醫(yī)學(xué)以及藥學(xué)本科生掌握分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本技能具有很好的指導(dǎo)意義。
第1章 動(dòng)物組織RNA的提取與電泳鑒定
實(shí)驗(yàn)1-1 動(dòng)物組織RNA的提取
實(shí)驗(yàn)1-2 RNA的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)
第2章 核酸與蛋白含量的測(cè)定——紫外分光光度法
實(shí)驗(yàn)2-1 RNA濃度測(cè)定
第3章 細(xì)菌質(zhì)粒DNA的堿法制備
實(shí)驗(yàn)3-1 質(zhì)粒DNA的提取
實(shí)驗(yàn)3-2 質(zhì)粒DNA瓊脂糖凝膠電泳鑒定
第4章 目的基因的RT-PCR
實(shí)驗(yàn)4-1 目的基因的RT-PCR
實(shí)驗(yàn)4-2 PCR產(chǎn)物電泳檢測(cè)與膠回收
第5章 質(zhì)粒與目的基因的酶切
實(shí)驗(yàn)5-1 質(zhì)粒與目的基因的酶切
實(shí)驗(yàn)5-2 酶切產(chǎn)物電泳鑒定和純化
第6章 目的基因與載體的連接、轉(zhuǎn)化
實(shí)驗(yàn)6-1 DNA分子細(xì)胞外重組
實(shí)驗(yàn)6-2 重組DNA轉(zhuǎn)化
第7章 轉(zhuǎn)化子的篩選與目的蛋白鑒定
實(shí)驗(yàn)7-1 轉(zhuǎn)化子篩選
實(shí)驗(yàn)7-2 目的蛋白Western斑點(diǎn)印跡法鑒定
實(shí)驗(yàn)7-3 目的蛋白Western印跡法實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)7-4 原核表達(dá)目的蛋白GST-mGAPDH的親和吸附純化
第8章 IPTG誘導(dǎo)大腸桿菌表達(dá)的最適條件
實(shí)驗(yàn)8-1 IPTG誘導(dǎo)時(shí)機(jī)對(duì)外源蛋白質(zhì)表達(dá)的影響
實(shí)驗(yàn)8-2 誘導(dǎo)物IPTG的濃度對(duì)外源蛋白質(zhì)表達(dá)的影響
實(shí)驗(yàn)8-3 IPTG誘導(dǎo)時(shí)間對(duì)外源蛋白質(zhì)表達(dá)的影響
實(shí)驗(yàn)8-4 外源蛋白質(zhì)誘導(dǎo)表達(dá)
第9章 實(shí)時(shí)定量PCR分析IPTG對(duì)啟動(dòng)子活性的調(diào)節(jié)作用
實(shí)驗(yàn)9-1 大腸桿菌RNA制備
實(shí)驗(yàn)9-2 實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)大腸桿菌中mGAPDH mRNA的表達(dá)量