目錄
第二版前言
第一版前言
第1章 抗體概述 1
1.1 抗體的發(fā)展歷程 1
1.1.1 抗體的發(fā)現(xiàn) 1
1.1.2 抗體技術(shù)的發(fā)展 2
1.2 抗體的分子結(jié)構(gòu) 4
1.2.1 抗體的概念 4
1.2.2 抗體分子的組成 5
1.2.3 抗體分子超家族 6
1.3 抗體的類型 8
1.3.1 IgG 8
1.3.2 IgM 9
1.3.3 IgA 9
1.3.4 IgE 10
1.3.5 IgD 10
1.4 抗體的功能 10
1.4.1 抗體分子的水解片段 11
1.4.2 抗體分子的功能區(qū)結(jié)構(gòu) 12
1.4.3 抗體抗原結(jié)合 13
1.4.4 補(bǔ)體激活 14
1.4.5 Fc 受體介導(dǎo)的效應(yīng)功能 15
1.5 抗體技術(shù)的應(yīng)用 15
1.5.1 免疫檢測試劑盒 16
1.5.2 免疫膠體金 16
1.5.3 免疫成像技術(shù) 17
1.5.4 醫(yī)學(xué)診斷 17
1.5.5 腫瘤治療 17
1.6 抗體技術(shù)的發(fā)展趨勢 18
1.6.1 抗體藥物的人源化 18
1.6.2 抗體藥物的微型化 19
1.6.3 免疫檢測的可視化 20
1.6.4 免疫檢測的自動化 21
第2章 抗原制備 22
2.1 完全抗原的制備 23
2.1.1 顆粒性抗原的制備 23
2.1.2 可溶性抗原的制備 24
2.2 小分子抗原的制備 26
2.2.1 載體選擇 26
2.2.2 有羧基和氨基的半抗原的偶聯(lián) 27
2.2.3 無羧基和氨基的半抗原的偶聯(lián) 29
2.3 超抗原 30
2.3.1 超抗原的種類 31
2.3.2 超抗原的生物學(xué)意義 31
2.4 抗原的鑒定 32
2.4.1 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳 32
2.4.2 雙向免疫擴(kuò)散試驗 32
2.4.3 免疫電泳 33
2.5 小分子半抗原偶聯(lián)物的鑒定 33
2.5.1 瓊脂糖凝膠電泳法 34
2.5.2 紫外掃描鑒定 34
2.5.3 紅外掃描鑒定 35
2.5.4 酶聯(lián)免疫吸附法 36
第3章 動物免疫與多克隆抗體制備 38
3.1 動物免疫 38
3.1.1 免疫動物的選擇 38
3.1.2 佐劑的選擇 40
3.1.3 免疫劑量和途徑 41
3.1.4 可溶性抗原的免疫方案 42
3.1.5 顆粒性抗原的免疫方案 43
3.2 血清采集 43
3.2.1 少量取血 43
3.2.2 中等量取血 44
3.2.3 大量采血 44
3.3 免疫效價檢測 45
3.4 多抗血清的純化與保存 46
3.4.1 多抗血清的純化 47
3.4.2 抗體的保存 47
3.5 多抗的性質(zhì)鑒定 47
3.5.1 多抗血清的特異性 47
3.5.2 血清效價測定 48
3.5.3 基于多抗的毒素檢測 49
3.5.4 利用多抗血清檢測實際樣品 49
第4章 單克隆抗體的篩選與鑒定 51
4.1 單克隆抗體產(chǎn)生的原理 51
4.2 細(xì)胞融合 52
4.2.1 飼養(yǎng)細(xì)胞 53
4.2.2 骨髓瘤細(xì)胞 53
4.2.3 融合劑 55
4.2.4 細(xì)胞融合 55
4.3 雜交瘤細(xì)胞的篩選 56
4.3.1 HAT 培養(yǎng)基篩選 56
4.3.2 iELISA 篩選 58
4.4 雜交瘤細(xì)胞的克隆化與鑒定 59
4.4.1 雜交瘤細(xì)胞的克隆化 60
4.4.2 抗體亞類分析 60
4.4.3 細(xì)胞染色體分析 61
4.4.4 細(xì)胞培養(yǎng)上清效價檢測 62
4.4.5 抗體特異性 63
4.5 雜交瘤細(xì)胞的保存與復(fù)蘇 65
4.5.1 雜交瘤細(xì)胞的保存 65
4.5.2 雜交瘤細(xì)胞的復(fù)蘇 66
第5章 抗體的大量制備與性質(zhì)研究 67
5.1 單克隆抗體大量制備的方法 67
5.1.1 動物體內(nèi)誘生法 67
5.1.2 體外培養(yǎng)法 69
5.1.3 雜交瘤細(xì)胞的無血清培養(yǎng) 70
5.2 單克隆抗體的純化 71
5.2.1 親和層析法 72
5.2.2 沉淀法 74
5.3 抗體的性質(zhì)研究 77
5.3.1 抗體特異性測定 77
5.3.2 抗體親和力測定 81
5.3.3 抗體穩(wěn)定性測定 83
5.4 抗體的檢測 84
5.4.1 檢測標(biāo)準(zhǔn)競爭曲線的繪制 84
5.4.2 加標(biāo)準(zhǔn)樣品檢測 85
第6章 基因工程抗體的制備 86
6.1 基因工程抗體的種類 86
6.1.1 人源化抗體 87
6.1.2 小分子抗體 91
6.1.3 特殊基因工程抗體 95
6.2 抗體基因庫的構(gòu)建 96
6.2.1 噬菌體抗體庫的構(gòu)建 97
6.2.2 半合成抗體庫的構(gòu)建 99
6.2.3 全合成抗體庫的構(gòu)建 100
6.2.4 天然抗體庫的構(gòu)建 100
6.3 抗體的篩選與鑒定 101
6.3.1 抗體庫的篩選方法 101
6.3.2 抗體特性的鑒定 105
6.3.3 篩選效率的檢測 108
第7章 抗體的改造 110
7.1 抗體親和力成熟 110
7.1.1 抗體親和力成熟過程 111
7.1.2 體內(nèi)抗體親和力成熟的策略 111
7.1.3 體外抗體親和力成熟的策略 112
7.1.4 體外親和力成熟實例 119
7.2 抗體穩(wěn)定性改造 121
7.2.1 單鏈抗體 121
7.2.2 二硫鍵穩(wěn)定的Fv(dsFv) 122
7.2.3 雙價dsFv 123
7.2.4 變型Fv 123
7.3 抗體人源化改造 124
7.3.1 嵌合抗體 125
7.3.2 CDR 移植抗體 125
7.3.3 SDR 移植抗體 126
7.3.4 噬菌體抗體庫構(gòu)建人源化抗體 127
7.3.5 完全人源化抗體 127
第8章 抗體表達(dá)與純化 129
8.1 抗體的融合表達(dá) 129
8.1.1 融合表達(dá)載體 130
8.1.2 融合表達(dá)標(biāo)簽 131
8.1.3 融合表達(dá)的宿主 134
8.2 抗體的分子伴侶表達(dá) 138
8.2.1 分子伴侶的分類 138
8.2.2 分子伴侶表達(dá)實例 139
8.3 表達(dá)抗體的純化 145
8.3.1 沉淀法 145
8.3.2 層析技術(shù) 146
第9章 免疫檢測技術(shù) 150
9.1 酶聯(lián)免疫吸附測定 150
9.1.1 ELISA 的基本原理 150
9.1.2 ELISA 的種類 151
9.1.3 ELISA 檢測方法的建立 155
9.2 免疫印跡技術(shù) 158
9.2.1 免疫印跡的基本步驟 158
9.2.2 免疫印跡結(jié)果的分析 160
9.3 膠體金檢測技術(shù) 160
9.3.1 膠體金制備 161
9.3.2 抗體的膠體金標(biāo)記 163
9.3.3 金標(biāo)試紙條的組裝 167
9.3.4 膠體金檢測 168
9.4 免疫檢測的其他技術(shù) 172
9.4.1 免疫沉淀法 172
9.4.2 免疫組織化學(xué) 173
9.4.3 免疫熒光技術(shù) 173
9.4.4 補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)技術(shù) 173
9.4.5 多元免疫分析技術(shù) 174
主要參考文獻(xiàn) 177