微生物生物技術(shù)——細(xì)菌系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)指南
定 價：118 元
叢書名：生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)指南系列
- 作者：(印)S. 待仕，(印)H.R. 達(dá)什主編
- 出版時間：2018/12/1
- ISBN：9787030576569
- 出 版 社：科學(xué)出版社
- 中圖法分類：TQ92-33
- 頁碼：260
- 紙張：
- 版次：31
- 開本：16
細(xì)菌是生命科學(xué)研究，特別是生物技術(shù)及其產(chǎn)業(yè)研發(fā)的重要材料。本指南介紹了微生物生物技術(shù)系列實(shí)驗(yàn)原理、反應(yīng)試劑的作用、操作步驟、操作流程、操作要點(diǎn)，以及如何觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果、如何記錄結(jié)果和對結(jié)果進(jìn)行分析對比、實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)問題的原因和解決問題的方法及注意事項(xiàng)，將復(fù)雜的生物技術(shù)研究方法，通俗易懂地介紹給讀者，便于本科生、碩士研究生、博士研究生、科學(xué)工作者和技術(shù)人員理解和建立成功的信心。內(nèi)容涉及細(xì)菌基礎(chǔ)分子微生物學(xué)、克隆和轉(zhuǎn)化、先進(jìn)的分子微生物學(xué)、分子微生物學(xué)計算機(jī)輔助研究和分子微生物學(xué)的應(yīng)用。本書既有常規(guī)的生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)，也融入了先進(jìn)生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)；既有理論研究實(shí)驗(yàn)，又有應(yīng)用型研究實(shí)驗(yàn)。
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目錄
第1章 細(xì)菌分子微生物學(xué)基礎(chǔ) 1
實(shí)驗(yàn)1.1 基因組DNA的分離 1
導(dǎo)言 1
原理 1
所需試劑及其作用 2
操作步驟 3
觀察 4
結(jié)果表格 4
疑難問題和解決方案 4
注意事項(xiàng) 5
操作流程 5
實(shí)驗(yàn)1.2 細(xì)菌裂解物的制備 6
導(dǎo)言 6
原理 7
操作步驟 8
觀察 9
結(jié)果表格 10
疑難問題和解決方案 10
注意事項(xiàng) 10
操作流程 11
實(shí)驗(yàn)1.3 質(zhì)粒的分離 13
導(dǎo)言 13
原理 14
所需試劑及其作用 15
操作步驟 16
觀察 17
結(jié)果表格 17
疑難問題和解決方案 17
注意事項(xiàng) 17
操作流程 18
實(shí)驗(yàn)1.4 細(xì)菌總RNA的分離 19
導(dǎo)言 19
原理 19
所需試劑及其作用 20
操作步驟 21
觀察 22
結(jié)果表格 22
疑難問題和解決方案 23
注意事項(xiàng) 23
操作流程 23
實(shí)驗(yàn)1.5 16S rRNA基因的擴(kuò)增 24
導(dǎo)言 24
原理 26
所需試劑及其作用 27
操作步驟 28
觀察 30
疑難問題和解決方案 30
注意事項(xiàng) 30
操作流程 31
實(shí)驗(yàn)1.6 瓊脂糖凝膠電泳 31
導(dǎo)言 31
原理 32
所需試劑及其作用 33
操作步驟 35
觀察 36
疑難問題和解決方案 37
注意事項(xiàng) 37
操作流程 37
第2章 克隆與轉(zhuǎn)化 39
實(shí)驗(yàn)2.1 感受態(tài)細(xì)胞制備和熱激轉(zhuǎn)化 39
導(dǎo)言 39
原理 40
所需試劑及其作用 41
操作步驟 41
觀察 43
疑難問題和解決方案 43
注意事項(xiàng) 43
操作流程 44
實(shí)驗(yàn)2.2 電穿孔 45
導(dǎo)言 45
原理 46
所需試劑及其作用 47
操作步驟 48
觀察 49
結(jié)果表格 49
疑難問題和解決方案 49
注意事項(xiàng) 50
操作流程 50
實(shí)驗(yàn)2.3 限制性內(nèi)切核酸酶消化和連接 51
導(dǎo)言 51
原理 51
所需試劑及其作用 55
操作步驟 56
觀察 57
疑難問題和解決方案 58
注意事項(xiàng) 58
操作流程 58
實(shí)驗(yàn)2.4 克隆所需合適載體系統(tǒng)的選擇 59
導(dǎo)言 59
克隆載體的不同類型 62
選擇合適克隆載體的標(biāo)準(zhǔn) 66
結(jié)論 68
實(shí)驗(yàn)2.5 藍(lán)-白斑篩選驗(yàn)證轉(zhuǎn)化 69
導(dǎo)言 69
原理 69
所需試劑及其作用 70
操作步驟 71
觀察 72
疑難問題和解決方案 72
注意事項(xiàng) 73
操作流程 73
實(shí)驗(yàn)2.6 PCR驗(yàn)證克隆 74
導(dǎo)言 74
原理 74
所需試劑及其作用 76
操作步驟 77
觀察 78
疑難問題和解決方案 78
注意事項(xiàng) 78
操作流程 79
第3章 分子微生物學(xué)先進(jìn)技術(shù) 80
實(shí)驗(yàn)3.1 cDNA的合成 80
導(dǎo)言 80
原理 80
所需試劑及其作用 82
操作步驟 83
觀察 85
疑難問題和解決方案 85
注意事項(xiàng) 85
操作流程 86
實(shí)驗(yàn)3.2 qRT-PCR分析基因表達(dá) 86
導(dǎo)言 86
原理 87
所需試劑及其作用 89
操作步驟 90
疑難問題和解決方案 92
注意事項(xiàng) 93
操作流程 93
實(shí)驗(yàn)3.3 用報道基因方法進(jìn)行基因表達(dá)分析 93
導(dǎo)言 94
原理 94
所需試劑及其作用 95
操作步驟 96
觀察 97
疑難問題和解決方案 97
注意事項(xiàng) 97
操作流程 97
實(shí)驗(yàn)3.4 基因表達(dá)半定量分析 98
導(dǎo)言 98
原理 99
所需試劑及其作用 100
操作步驟 101
觀察 103
觀察表格 103
疑難問題和解決方案 104
注意事項(xiàng) 104
操作流程 105
實(shí)驗(yàn)3.5 Northern印跡 105
導(dǎo)言 105
原理 106
所需試劑及其作用 108
操作步驟 109
觀察 111
疑難問題和解決方案 111
注意事項(xiàng) 111
操作流程 111
實(shí)驗(yàn)3.6 宏基因組DNA的分離 113
導(dǎo)言 113
原理 113
所需試劑及其作用 115
操作步驟 116
觀察 116
結(jié)果表格 117
疑難問題和解決方案 117
注意事項(xiàng) 117
操作流程 117
實(shí)驗(yàn)3.7 細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)粒消除 118
導(dǎo)言 118
原理 119
所需試劑及其作用 120
操作步驟 121
觀察 121
結(jié)果表格 121
疑難問題和解決方案 121
注意事項(xiàng) 121
操作流程 122
實(shí)驗(yàn)3.8 細(xì)菌接合 122
導(dǎo)言 122
原理 123
所需試劑及其作用 124
操作步驟 125
觀察 125
結(jié)果表格 126
疑難問題和解決方案 126
注意事項(xiàng) 126
操作流程 126
實(shí)驗(yàn)3.9 細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo) 127
導(dǎo)言 127
原理 128
所需試劑及其作用 129
操作步驟 130
觀察 131
結(jié)果表格 131
疑難問題和解決方案 131
注意事項(xiàng) 131
操作流程 131
第4章 分子微生物多樣性 133
實(shí)驗(yàn)4.1 質(zhì)粒圖譜分析 133
導(dǎo)言 133
原理 133
所需試劑及其作用 134
操作步驟 136
觀察 139
結(jié)果表格 139
疑難問題和解決方案 140
注意事項(xiàng) 140
操作流程 140
實(shí)驗(yàn)4.2 擴(kuò)增核糖體DNA限制性分析研究細(xì)菌相關(guān)性 142
導(dǎo)言 142
原理 142
所需試劑及其作用 143
操作步驟 145
觀察 149
結(jié)果表格 149
疑難問題和解決方案 150
注意事項(xiàng) 150
操作流程 150
實(shí)驗(yàn)4.3 變性梯度凝膠電泳(DGGE)分析對宏基因組細(xì)菌多態(tài)性研究 152
導(dǎo)言 152
原理 152
所需試劑及其作用 153
操作步驟 154
觀察 158
結(jié)果表格 158
疑難問題和解決方案 158
操作流程 159
實(shí)驗(yàn)4.4 脈沖場凝膠電泳(PFGE)分析 159
導(dǎo)言 160
原理 161
所需試劑及其作用 162
操作步驟 163
觀察 165
結(jié)果表格 165
疑難問題和解決方案 165
注意事項(xiàng) 166
操作流程 166
實(shí)驗(yàn)4.5 細(xì)菌多重PCR快速檢測 168
導(dǎo)言 168
原理 169
所需試劑及其作用 169
操作步驟 171
觀察 171
結(jié)果表格 171
疑難問題和解決方案 172
注意事項(xiàng) 172
操作流程 172
實(shí)驗(yàn)4.6 腸桿菌基因間重復(fù)共有序列和細(xì)菌基因外重復(fù)回文序列PCR技術(shù) 173
導(dǎo)言 173
原理 174
所需試劑及其作用 175
操作步驟 177
觀察 179
結(jié)果表格 179
疑難問題和解決方案 179
注意事項(xiàng) 180
操作流程 180
第5章 分子微生物學(xué)計算機(jī)輔助研究 181
實(shí)驗(yàn)5.1 基因序列分析 181
導(dǎo)言 181
樣品序列分析工具 181
原理 181
操作步驟 182
操作流程 187
實(shí)驗(yàn)5.2 基因庫序列的遞交 188
導(dǎo)言 188
原理 188
操作步驟 189
操作流程 194
實(shí)驗(yàn)5.3 系統(tǒng)發(fā)育樹 194
導(dǎo)言 194
解讀樹 195
系統(tǒng)發(fā)育樹軟件 195
原理 195
操作步驟 197
操作流程 201
實(shí)驗(yàn)5.4 引物設(shè)計 201
導(dǎo)言 201
用軟件設(shè)計引物 202
引物設(shè)計指南 203
使用NetPrimer軟件設(shè)計引物程序 203
操作流程 206
第6章 分子微生物學(xué)的應(yīng)用 207
實(shí)驗(yàn)6.1 細(xì)菌生物膜在玻璃管中的形成 207
導(dǎo)言 207
原理 208
所需試劑及其作用 209
操作步驟 209
觀察 209
結(jié)果表格 210
疑難問題和解決方案 210
注意事項(xiàng) 211
操作流程 211
實(shí)驗(yàn)6.2 微孔板中細(xì)菌生物膜形成的篩選 212
導(dǎo)言 212
原理 213
所需試劑及其作用 213
操作步驟 214
觀察 214
結(jié)果表格 214
疑難問題和解決方法 215
注意事項(xiàng) 215
操作流程 216
實(shí)驗(yàn)6.3 生物膜共聚焦激光掃描顯微鏡分析 217
導(dǎo)言 217
原理 218
所需試劑及其作用 219
操作步驟 220
觀察 221
結(jié)果表格 221
注意事項(xiàng) 222
疑難問題和解決方案 222
操作流程 222
實(shí)驗(yàn)6.4 細(xì)菌生物膜熒光顯微鏡和圖像分析 223
導(dǎo)言 223
原理 223
所需試劑及其作用 224
操作步驟 225
結(jié)果表格 228
注意事項(xiàng) 228
操作流程 228
實(shí)驗(yàn)6.5 生物表面活性劑的篩選 229
導(dǎo)言 229
原理 230
所需試劑及其作用 231
操作步驟 231
觀察 232
結(jié)果表格 232
操作流程 232
實(shí)驗(yàn)6.6 多環(huán)芳烴細(xì)菌生物治理的光譜光度分析 233
導(dǎo)言 233
原理 233
所需試劑及其作用 234
操作步驟 235
觀察 235
結(jié)果表格 236
注意事項(xiàng) 236
操作流程 236
實(shí)驗(yàn)6.7 篩選金屬富集細(xì)菌的硫化氫實(shí)驗(yàn) 237
導(dǎo)言 237
原理 237
所需試劑及其作用 238
操作步驟 239
觀察 239
結(jié)果表格 240
疑難問題和解決方案 240
注意事項(xiàng) 240
操作流程 240
參考文獻(xiàn) 242
進(jìn)一步讀物 243
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