《分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》編寫力求全面反映分子生物學(xué)領(lǐng)域新技術(shù)的發(fā)展,適應(yīng)創(chuàng)新性人才的培養(yǎng)。書(shū)中以細(xì)菌細(xì)胞、酵母細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞以及提取原代的腹腔巨噬細(xì)胞作為研究模型,安排基礎(chǔ)的分子生物學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn),通過(guò)這些實(shí)驗(yàn)技術(shù)的操作,使學(xué)生循序漸進(jìn)掌握基礎(chǔ)的分子生物學(xué)基本技術(shù)和實(shí)驗(yàn)技能,從而具備獨(dú)立開(kāi)展原核和真核相關(guān)分子生物學(xué)課題研究的能力。教材適用于高等學(xué)校生物工程、生物技術(shù)、生物科學(xué)等專業(yè)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的教學(xué),也可作為生物學(xué)專業(yè)研究生或相關(guān)領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)人員的參考書(shū)。
1.教材定位準(zhǔn)確,內(nèi)容豐富。本書(shū)在實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目設(shè)計(jì)上以分子生物學(xué)技術(shù)作為主線,涵蓋了以細(xì)菌、酵母細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞和原代淋巴細(xì)胞為模型的實(shí)驗(yàn)操作。每章內(nèi)容既相互獨(dú)立又彼此關(guān)聯(lián),具有系統(tǒng)性和高階性。
2.以學(xué)生為本,加強(qiáng)三基訓(xùn)練。本書(shū)設(shè)計(jì)27個(gè)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn),原理清晰,步驟詳細(xì)易跟隨,并配有清晰的圖解,必要的注意事項(xiàng)提示和思考題,有利于加強(qiáng)對(duì)學(xué)生實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)理論、基本知識(shí)和基本技能的培養(yǎng)。同時(shí),在強(qiáng)化理論學(xué)習(xí)和實(shí)驗(yàn)操作的基礎(chǔ)上,突出生物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備和操作的基本規(guī)范,概括了實(shí)驗(yàn)樣本的保存與處理原則,有利于規(guī)范學(xué)生在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的行為準(zhǔn)則。
3.與時(shí)俱進(jìn),注重實(shí)踐應(yīng)用。體現(xiàn)新教學(xué)理念,反映新教學(xué)成果,如在細(xì)菌實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)部分,重現(xiàn)了科研過(guò)程中,目的基因的獲得,重組質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定表達(dá)等。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞和原代淋巴細(xì)胞部分,體現(xiàn)基礎(chǔ)與前沿的有機(jī)結(jié)合。將細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞基因表達(dá)檢測(cè)等與淋巴細(xì)胞的功能研究進(jìn)行有機(jī)結(jié)合。
分子生物學(xué)是研究核酸、 蛋白質(zhì)等生物大分子的結(jié)構(gòu)及其在遺傳信息和細(xì)胞信息傳遞中的作用規(guī)律和相互關(guān)系的交叉學(xué)科, 從廣義上講, 蛋白質(zhì)、 核酸等生物大分子的結(jié)構(gòu)和功能研究都屬于分子生物學(xué)的范疇。 當(dāng)人們認(rèn)識(shí)到同一生物不同世代之間的連續(xù)性是由生物自身所攜帶的遺傳物質(zhì)所決定的之后, 人類開(kāi)始從分子水平上真正揭開(kāi)生物世界的奧秘, 并由被動(dòng)地適應(yīng)自然界轉(zhuǎn)向主動(dòng)地改造和重組。 科學(xué)家為揭示這些遺傳密碼所進(jìn)行的努力就成為人類征服改造自然界的一部分, 而以生物大分子為研究對(duì)象的分子生物學(xué)就迅速成為現(xiàn)代生物學(xué)領(lǐng)域里最具活力的學(xué)科。
分子生物學(xué)的發(fā)展為人類認(rèn)識(shí)生命現(xiàn)象帶來(lái)了前所未有的機(jī)會(huì), 也為人類利用和改造生物創(chuàng)造了極為廣闊的前景。 分子生物學(xué)技術(shù)日新月異, 發(fā)展迅速。 但所有高深的分子生物學(xué)技術(shù)都是建立在實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)之上。 本書(shū)根據(jù)分子生物學(xué)教學(xué)大綱的要求, 依托浙江工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院學(xué)科發(fā)展特色, 結(jié)合教師的科研經(jīng)歷編寫。 全書(shū)共七章, 介紹了實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)知識(shí)、 實(shí)驗(yàn)樣品的保存處理及實(shí)驗(yàn)室工作人員的基本素質(zhì)與行為準(zhǔn)則, 分別以細(xì)菌細(xì)胞、 酵母細(xì)胞、 哺乳動(dòng)物細(xì)胞以及腹腔巨噬細(xì)胞作為研究模型, 設(shè)計(jì)分子生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn), 通過(guò)這些基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)的操作, 循序漸進(jìn)掌握分子生物學(xué)基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)和實(shí)驗(yàn)技能, 從而具備獨(dú)立開(kāi)展原核生物和真核生物分子生物學(xué)課題?究的能力。
本書(shū)編寫人員均為浙江工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院從事一線科研和實(shí)驗(yàn)教學(xué)的老師, 主編為靳遠(yuǎn)祥教授, 參編人員為胡青蓮、 王彩紅、 朱廷恒。 所編寫的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容既包括目前已經(jīng)應(yīng)用于本科生實(shí)驗(yàn)教學(xué)的內(nèi)容, 也包含有研究生部分課題的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。 所有的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目均是實(shí)踐過(guò)的成熟實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 非常感謝參與本書(shū)素材收集與文稿整理工作的課題組的研究生魯卓婷、 徐禮旺、 李婧瑜、 馮佳宇、 王彤、 黃曉雨、 賀英、 楚楚、 方利婭和姬祥。
本教材適用于高等學(xué)校生物工程、 生物技術(shù)、 生物科學(xué)等專業(yè)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的教學(xué), 也可作為相關(guān)專業(yè)研究生或相關(guān)領(lǐng)域研發(fā)人員的參考書(shū)。 本書(shū)是全體編寫教師共同努力的結(jié)晶。 編寫過(guò)程中我們力求準(zhǔn)確和實(shí)用。 但是, 鑒于該書(shū)專業(yè)性和實(shí)踐性較強(qiáng), 受知識(shí)和能力所限, 難免會(huì)出現(xiàn)不足和錯(cuò)誤之處, 真誠(chéng)希望各位讀者提出寶貴的意見(jiàn)和建議。
靳遠(yuǎn)祥
教授,博士生導(dǎo)師,浙江工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院生物資源與生物環(huán)保研究所所長(zhǎng)。浙江省杰出青年基金獲得者。主要從事生物活性物質(zhì)功效機(jī)理、外泌體與腸道微環(huán)境調(diào)控、環(huán)境毒理等方面的研究。主持國(guó)家自然科學(xué)基金、省杰出青年基金、省重點(diǎn)基金項(xiàng)目等10余項(xiàng),作為骨干參與國(guó)家重點(diǎn)基金項(xiàng)目、國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃課題、省領(lǐng)雁項(xiàng)目等。獲江西省自然科學(xué)獎(jiǎng)二等獎(jiǎng)1項(xiàng)、浙江省自然科學(xué)三等獎(jiǎng)1項(xiàng)。以第一或通訊作者發(fā)表學(xué)術(shù)論文150余篇。
第1章 實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)知識(shí)
第二章 重組 DNA 分子克隆的制備及鑒定
實(shí)驗(yàn)一 動(dòng)物肝組織中總 RNA 的提取及測(cè)定
實(shí)驗(yàn)二 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)三 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT- PCR)擴(kuò)增克隆基因
實(shí)驗(yàn)四 DNA 膠回收及鑒定
實(shí)驗(yàn)五 感受態(tài)細(xì)胞的制備
實(shí)驗(yàn)六 DNA 連接、細(xì)菌轉(zhuǎn)化及篩選
實(shí)驗(yàn)七 菌落 PCR
實(shí)驗(yàn)八 質(zhì)粒提取及外源基因的酶切鑒定
實(shí)驗(yàn)九 一步克隆法制備綠色熒光蛋白(GFP)重組大腸桿菌
實(shí)驗(yàn)十 大腸桿菌中 GFP 的誘導(dǎo)表達(dá)及熒光顯微鏡觀察
第三章 外源基因在釀酒酵母中的表達(dá)與鑒定
實(shí)驗(yàn)十一 外源基因的擴(kuò)增
實(shí)驗(yàn)十二 質(zhì)粒的構(gòu)建
實(shí)驗(yàn)十三 表達(dá)載體的構(gòu)建
實(shí)驗(yàn)十四 表達(dá)載體的遺傳轉(zhuǎn)化
實(shí)驗(yàn)十五 SDS-PAGE 鑒定蛋白質(zhì)表達(dá)
實(shí)驗(yàn)十六 蛋白質(zhì)印跡法鑒定蛋白質(zhì)表達(dá)
第四章 哺乳動(dòng)物細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)操作
實(shí)驗(yàn)十七 小鼠肝臟原代細(xì)胞培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)十八 哺乳細(xì)胞的復(fù)蘇、培養(yǎng)及凍存
實(shí)驗(yàn)十九 MTT 法檢測(cè)化療藥物紫杉醇對(duì)細(xì)胞活力的影響
實(shí)驗(yàn)二十 CCK-8 法檢測(cè)化療藥物紫杉醇對(duì)細(xì)胞活力的影響
實(shí)驗(yàn)二十一 結(jié)晶紫染色觀察化療藥物紫杉醇對(duì)細(xì)胞增殖的影響
實(shí)驗(yàn)二十二 脂質(zhì)體介導(dǎo)的 EGFP 質(zhì)粒細(xì)胞轉(zhuǎn)染及顯微鏡觀察
實(shí)驗(yàn)二十三 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè) EGFP 基因在細(xì)胞中的表達(dá)水平
第五章 腹腔巨噬細(xì)胞的提取及功能研究
實(shí)驗(yàn)二十四 腹腔巨噬細(xì)胞的分離提取及形態(tài)觀察
實(shí)驗(yàn)二十五 RT-qPCR 檢測(cè) LPS 誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子 mRNA 表達(dá)
實(shí)驗(yàn)二十六 ELISA 檢測(cè) LPS 誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子的分泌
實(shí)驗(yàn)二十七 流式細(xì)胞儀測(cè)定腹腔巨噬細(xì)胞 M1 / M2 型極化
第六章 實(shí)驗(yàn)樣品的保存處理
第七章 實(shí)驗(yàn)室工作人員的基本素質(zhì)與行為準(zhǔn)則
附 錄
附錄一 實(shí)驗(yàn)室常用試劑和培養(yǎng)基的配制方法
附錄二 生物類廢棄物的處理方法
參考文獻(xiàn)