《基因工程技術(shù)》按照基因工程藥品生產(chǎn)上游技術(shù)崗位的典型工作任務(wù)編寫,分為四個項目,項目一為實驗操作基本技能,主要學習瓊脂糖凝膠電泳定性檢測目的DNA、紫外分光光度計定量檢測目的DNA、大腸桿菌培養(yǎng)基的制備和大腸桿菌的分離與培養(yǎng)四種基因工程實驗常用技能;項目二為核酸的分離與純化,主要學習CTAB法、磁珠法和離心柱法三種常用基因組DNA提取方法,以及堿裂解法對小量質(zhì)粒DNA和大量質(zhì)粒DNA的提取純化方法;項目三為PCR獲取目的基因,通過對常規(guī)PCR擴增目的基因、重疊PCR合成目的基因、實時熒光定量PCR檢測目的基因三個任務(wù)的學習和訓練,掌握PCR基本原理,熟練基本操作流程;項目四為重組質(zhì)粒的構(gòu)建與篩選,通過大腸桿菌感受態(tài)的制備,重組質(zhì)粒的構(gòu)建與篩選,目的基因的蛋白表達、純化與功能驗證三個任務(wù)的學習,掌握目的基因從合成到表達的一般過程,熟練酶切、連接、轉(zhuǎn)化、菌檢、蛋白純化與鑒定的基本操作。本教材設(shè)計為活頁式新形態(tài)教材,以便更靈活選取教學內(nèi)容;配套有豐富的數(shù)字資源,可掃描二維碼學習觀看;教材有機融入課程思政與職業(yè)素養(yǎng)內(nèi)容,落實立德樹人根本任務(wù)。
本教材不僅可作為職業(yè)教育生物技術(shù)、生物制藥、制藥工程等相關(guān)專業(yè)貫通培養(yǎng)的教材使用,也可作為基因工程藥品生產(chǎn)人員、醫(yī)學生物技術(shù)PCR檢測人員、核酸檢測員的參考書籍。
項目一 實驗操作基本技能 001
任務(wù)1 瓊脂糖凝膠電泳定性檢測目的DNA 002
任務(wù)描述 002
任務(wù)準備 002
任務(wù)實施 003
思政微課堂1 我國分子生物學的發(fā)展與成就 007
擴展學習 十二烷基硫酸鈉- 聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE) 008
工作任務(wù)單 011
教師考核 012
任務(wù)檢測 013
任務(wù)2 紫外分光光度計定量檢測目的DNA 015
任務(wù)描述 015
任務(wù)準備 015
任務(wù)實施 016
思政微課堂2 我國在世界上首次人工合成酵母丙氨酸轉(zhuǎn)移核糖核酸 022
擴展學習 酶標儀檢測蛋白活性 023
任務(wù)檢測 024
工作任務(wù)單 025
教師考核 026
任務(wù)3 大腸桿菌培養(yǎng)基的制備 027
任務(wù)描述 027
任務(wù)準備 027
任務(wù)實施 028
思政微課堂3 安全工作重于泰山 030
擴展學習 培養(yǎng)基的分類及常用培養(yǎng)基 031
工作任務(wù)單 033
教師考核 034
任務(wù)檢測 035
任務(wù)4 大腸桿菌的分離與培養(yǎng) 037
任務(wù)描述 037
任務(wù)準備 037
任務(wù)實施 038
思政微課堂4 世界上第一個人工全合成結(jié)晶牛胰島素在中國誕生 040
擴展學習 微生物無菌操作技術(shù) 041
工作任務(wù)單 043
教師考核 044
任務(wù)檢測 045
項目二 核酸的分離與純化 047
任務(wù)1 CTAB法提取植物基因組DNA 048
任務(wù)描述 048
任務(wù)準備 048
任務(wù)實施 049
思政微課堂5 DNA結(jié)構(gòu)的研究歷程 053
擴展學習 SDS法提取細胞DNA 054
工作任務(wù)單 055
教師考核 056
任務(wù)檢測 057
任務(wù)2 磁珠法提取全血基因組DNA 059
任務(wù)描述 059
任務(wù)準備 059
任務(wù)實施 060
思政微課堂6 生物遺傳資源的保護 062
擴展學習 核酸提取儀 063
工作任務(wù)單 065
教師考核 066
任務(wù)檢測 067
任務(wù)3 離心柱法提取石蠟組織切片基因組DNA 069
任務(wù)描述 069
任務(wù)準備 069
任務(wù)實施 070
思政微課堂7 保護環(huán)境,敬畏自然 073
擴展學習 石蠟組織切片的常用脫蠟方法 074
工作任務(wù)單 075
教師考核 076
任務(wù)檢測 077
任務(wù)4 堿裂解法小量提取大腸桿菌質(zhì)粒DNA 079
任務(wù)描述 079
任務(wù)準備 079
任務(wù)實施 080
思政微課堂8 人類基因組計劃 083
擴展學習 質(zhì)粒抽提常用方法及試劑盒選擇 085
工作任務(wù)單 087
教師考核 088
任務(wù)檢測 089
任務(wù)5 堿裂解法大量提取大腸桿菌質(zhì)粒DNA 091
任務(wù)描述 091
任務(wù)準備 091
任務(wù)實施 092
思政微課堂9 讓老百姓用得上、用得起更多創(chuàng)新藥 095
擴展學習 細菌內(nèi)毒素 097
工作任務(wù)單 099
教師考核 100
任務(wù)檢測 101
項目三 PCR獲取目的基因 103
任務(wù)1 常規(guī)PCR擴增目的基因 104
任務(wù)描述 104
任務(wù)準備 104
任務(wù)實施 105
思政微課堂10 PCR之父 109
擴展學習 三代PCR的發(fā)展 110
工作任務(wù)單 111
教師考核 112
任務(wù)檢測 113
任務(wù)2 重疊PCR合成目的基因 115
任務(wù)描述 115
任務(wù)準備 115
任務(wù)實施 116
思政微課堂11 預防核酸檢測“假陽性” 118
擴展學習 重疊PCR的應(yīng)用及引物設(shè)計注意事項 119
工作任務(wù)單 121
教師考核 122
任務(wù)檢測 123
任務(wù)3 實時熒光定量PCR檢測目的基因 125
任務(wù)描述 125
任務(wù)準備 125
任務(wù)實施 126
思政微課堂12 抗擊新冠疫情科技攻關(guān)的“中國速度” 131
擴展學習 數(shù)字PCR 132
工作任務(wù)單 133
教師考核 134
任務(wù)檢測 135
項目四 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與篩選 137
任務(wù)1 大腸桿菌感受態(tài)的制備 138
任務(wù)描述 138
任務(wù)準備 138
任務(wù)實施 139
思政微課堂13 當好藥品質(zhì)量“守門員” 141
擴展學習 電轉(zhuǎn)化法制備大腸桿菌感受態(tài)細胞 142
工作任務(wù)單 143
教師考核 144
任務(wù)檢測 145
任務(wù)2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與篩選 147
任務(wù)描述 147
任務(wù)準備 147
任務(wù)實施 148
思政微課堂14 用法律守好倫理之門 151
擴展學習 重組載體構(gòu)建常見的問題及解決方法 153
工作任務(wù)單 155
教師考核 156
任務(wù)檢測 157
任務(wù)3 目的基因的蛋白表達、純化與功能驗證 159
任務(wù)描述 159
任務(wù)準備 159
任務(wù)實施 160
思政微課堂15 藍色血液引來的殺身之禍 163
擴展學習 重組蛋白表達技術(shù) 164
工作任務(wù)單 165
教師考核 166
任務(wù)檢測 167
參考文獻 169