上篇 排膠理論基礎(chǔ)
第一章 天然橡膠生物合成機制研究進展
一、植物中異戊二烯合成路徑
二、橡膠粒子在天然橡膠合成中的作用
三、線粒體為橡膠烴合成和膠乳再生提供物質(zhì)和能量保障
四、天然橡膠合成機理研究重要進展——橡膠轉(zhuǎn)移酶及其復(fù)合體
五、基于巴西橡膠樹橡膠粒子離體天然橡膠合成體系
六、人工橡膠粒子構(gòu)建取得重要進展
七、展望
第二章 排膠過程活性氧產(chǎn)生和清除研究進展
一、死皮引起橡膠樹樹皮結(jié)構(gòu)與蛋白組成變化
二、橡膠樹死皮發(fā)生相關(guān)假說
三、死皮防控技術(shù)
四、死皮誘導(dǎo)的水分和活性氧機制模型
五、展望
第三章 橡膠樹轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究進展
一、轉(zhuǎn)錄調(diào)控的原理簡介
二、橡膠生物合成中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
三、植物MYB轉(zhuǎn)錄因子的研究進展
四、植物MYB44轉(zhuǎn)錄因子研究進展
五、MYB44轉(zhuǎn)錄因子在橡膠樹抗逆研究中的展望
下篇 技術(shù)指南
第四章 轉(zhuǎn)錄因子分析方法及其在橡膠樹排膠機制研究中的應(yīng)用
一、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)與功能簡介
二、生物信息學分析
三、轉(zhuǎn)錄因子發(fā)現(xiàn)與鑒定方法
四、互作蛋白與DNA篩選鑒定
五、蛋白質(zhì)互作的研究方法
六、轉(zhuǎn)基因功能驗證
七、轉(zhuǎn)錄調(diào)控技術(shù)在橡膠樹排膠功能研究中的展望
第五章 橡膠樹MYB轉(zhuǎn)錄因子克隆、生物信息學和表達分析
一、橡膠樹HbMYBs基因成員結(jié)構(gòu)分析
二、材料處理方法
三、實驗方法
四、結(jié)果與分析
五、討論
第六章 橡膠樹膠乳均一化酵母雙雜交cDNA文庫構(gòu)建
一、材料與方法
二、結(jié)果與分析
三、討論
第七章 抗體制備檢測與Western檢測
一、HblMYC3研究背景
二、橡膠樹HbIMYC3多克隆抗體制備和檢測
三、Western蛋白檢測
第八章 ABA信號途徑bZIP轉(zhuǎn)錄因子的Pull-down分析
一、ABA的抗逆功能
二、GST Pull-down證明體內(nèi)蛋白互作
第九章 ChiP-seq鑒定轉(zhuǎn)錄因子目標基因
一、橡膠樹光照樣品的處理
二、ChIP免疫沉淀實驗
三、ChIP文庫構(gòu)建流程
四、信息分析流程
五、數(shù)據(jù)過濾質(zhì)控
六、與參考序列比對
七、Peak分析
八、Peak注釋
第十章 轉(zhuǎn)錄因子蛋白互作分析方法
一、HbSRPP1基因克隆與分析檢測
二、HbSRPPI菌落PCR檢測和陽性克隆鑒定
三、酵母表達載體構(gòu)建
四、天然橡膠合成關(guān)鍵酶酵母表達載體構(gòu)建
五、基于酵母雙雜交驗證橡膠生物合成關(guān)鍵酶互作
六、BiFC技術(shù)驗證蛋白互作
七、螢火素酶實驗驗證蛋白互作
第十一章 轉(zhuǎn)基因擬南芥技術(shù)驗證轉(zhuǎn)錄因子功能
一、遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥驗證基因功能
二、HbMYB44轉(zhuǎn)基因擬南芥的功能驗證
第十二章 轉(zhuǎn)錄因子亞細胞定位分析
一、融合表達載體構(gòu)建
二、HbMYB44亞細胞定位
第十三章 橡膠樹樹皮線粒體提取及相關(guān)生理參數(shù)測定
一、橡膠樹線粒體提取及純化
二、線粒體活性相關(guān)生理參數(shù)測定
三、橡膠樹樹皮電鏡樣品制備與超微結(jié)構(gòu)觀察
第十四章 橡膠樹樹皮及膠乳中亞細胞組分蛋白質(zhì)的提取及LC-MS分析
一、蛋白提取方法
二、蛋白質(zhì)的胰蛋白酶水解
三、用于質(zhì)譜數(shù)據(jù)檢索的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫的準備及其他數(shù)據(jù)處理
四、蛋白質(zhì)的免疫學驗證
第十五章 橡膠樹膠乳代謝組分析
一、橡膠樹材料處理
二、膠乳c乳清樣品制備
三、數(shù)據(jù)分析
四、差異代謝物的篩選
五、差異代謝物分析
參考文獻
附錄1 載體和菌株
附錄2 生化試劑及實驗儀器
附錄3 培養(yǎng)基配制
附錄4 試劑配制及物品準備
附錄5 縮略語
項目資助