本書是全國高等院校生物實驗教學十三五規(guī)劃教材。華中科技大學生命科學與技術學院實驗教學中心自2003年成立以來,在注重本科生基礎實驗技能教學的同時,一直致力于綜合實驗項目的設計與教學。本書將十多年來積累的實驗方案收集、整理,并結合近年來生物研究技術的新進展,推陳出新,積集成冊。本書內容由三十五個綜合實驗方案組成。本書為開放式實驗教學而設計、編寫,旨在培養(yǎng)學生學會根據(jù)需要解決的問題,靈活運用實驗技術進行實驗設計,并通過合理規(guī)劃實驗過程,獨立完成課題研究。本書不僅可以作為高等學校高年級本科生綜合設計性實驗的參考實驗方案,還可以作為各校研究生實驗教材,填補了這方面的教材空缺。
★本書可為擬學習相關實驗技術和研究內容的所有讀者提供幫助,也可為從事生命科學本科生實驗教學的教師提供有價值的參考。相信該書的出版能為其它院校的本科實驗教學起到很好的促進和示范作用。
★內容體系整體優(yōu)化,在實驗內容選擇和編寫上突出綜合設計、實踐能力和學科交叉,集綜合設計與實驗研究于一體,在實驗原理、步驟等環(huán)節(jié)提供了實驗探索與設計的思路及分析方法。
★本書的某些關鍵實驗技術還采用了錄像、動畫等數(shù)字課程,大量圖片配有彩色圖片,均以二維碼的形式展現(xiàn),實現(xiàn)了紙數(shù)融合、學習方式多元的立體化教材。
華中科技大學生命科學與技術學院實驗教學中心自2003年成立以來,在注重本科生基礎實驗技能教學的同時,一直致力于綜合實驗項目的設計與教學。經過十多年的努力,已經形成了一批適用于本科生學習的綜合實驗方案,包括反映經典生物學實驗內容,和體現(xiàn)學科前沿、學科交叉等特色的實驗設計。這些實驗方案在生物科學大實驗、生物技術大實驗、生物物理大實驗等綜合性實驗教學課程中經過積極使用和研究,激發(fā)了學生參與實驗的積極性,提高了學生綜合設計實驗能力,為大批學生在省、國家、國際等各級生物學競賽中取得優(yōu)異的成績奠定了很好的基礎。
我們將十多年來積累的實驗方案收集、整理,并結合近年來生物研究技術的新進展,推陳出新,積集成冊。本書內容由三十五個綜合實驗方案組成。實驗一至實驗六以擬南芥、大腸桿菌、秀麗隱桿線蟲、黑腹果蠅、斑馬魚、小鼠等常用模式生物的培養(yǎng)及觀察技術為主,使學生能掌握規(guī)范的模式生物實驗室培養(yǎng)及實驗技術,為應用模式生物研究生命現(xiàn)象打下實驗基礎。實驗七至實驗十七以核酸、蛋白質等生物大分子的提取、純化實驗技術為主。實驗方案根據(jù)各類分子不同的理化特性,采用離心分離、沉淀分離、吸附層析技術、離子交換層析技術、凝膠層析技術、親和層析技術、膜分離技術、等點聚焦等一種或多種分離純化方法,將DNA、RNA、蛋白質等生物大分子或花青素等生物活性小分子從菌液、動植物組織細胞、天然材料等生物材料中提取、純化出來,并進行濃度、純度、活性、性質、得率等方面的檢測與鑒定,保證提取物的質與量。實驗十八至三十五主要是以目前生物學功能、結構、材料等基礎研究領域常用的先進實驗技術為主,含有基因工程、免疫熒光、組織切片、遺傳篩選、細胞工程、生物物理、生物材料等領域常規(guī)實驗技術的規(guī)范操作及其在基礎研究中的綜合應用。
本書編寫時,努力從學生自主完成實驗任務的角度出發(fā),在內容結構上強調了以下幾個方面:
1.每個實驗方案都有明確的問題和需達到的具體要求,幫助學生明確實驗目標,準確把握實驗任務與方向;
2.既有實驗原理,也有供學生參考的、以流程圖形式出現(xiàn)的實驗設計方案,便于學生快速掌握解決問題的思路;
3.在實驗操作步驟中,一些較復雜的基礎實驗技術或實驗儀器的操作以圖片、動畫、虛擬仿真操作或錄像等形式供學生實驗時參考學習,另有一些易錯、難做、危險等的操作細節(jié)也以文字的形式在相應的操作環(huán)節(jié)中加以提醒。
4.設計實驗結果與討論部分,幫助學生學會展示、呈現(xiàn)實驗結果,厘清實驗結果討論思路,學會有條理地針對實驗過程及結果展開分析與討論,并得出結論。
本書為開放式實驗教學而設計、編寫,旨在培養(yǎng)學生學會根據(jù)需要解決的問題,靈活運用實驗技術進行實驗設計,并通過合理規(guī)劃實驗過程,獨立完成課題研究,所有實驗方案不能以常規(guī)的教學學時來衡量。
生命科學發(fā)展日新月異,實驗教學的發(fā)展需要與時俱進。本書的實驗方案只是拋磚引玉,教師及學生在使用本書時可以圍繞新的問題,重新進行實驗設計,將相關的實驗技術再次組合,形成新的實驗方案用于研究、教學或實驗。
本書不僅可以作為高等學校高年級本科生綜合設計性實驗的參考實驗方案,還可以作為各校研究生實驗教材,填補了這方面的教材空缺。
感謝華中科技大學生命科學與技術學院的劉亞豐、謝青、肖靚、周愛文等老師對實驗方案的教學與應用,感謝常俊麗、陳明潔、汪盛、韓家鵬、劉飛、黃毓文、劉希良、呂月霞、徐旋等老師與同學在實驗試做、圖片采集等方面的辛苦工作。
由于編寫倉促,水平有限,疏漏難免,誠懇希望廣大高校生物科學教師提出寶貴建議和意見,以使得本書能夠更好地滿足教師教學和學生學習的需要。
唐朝暉,女,博士,華中科技大學生命科學與技術學院實驗教學中心副主任,研究方向為人類疾病遺傳及疾病基因功能研究、實驗教學,教授遺傳學實驗、發(fā)育生物學實驗、高級生化與分子生物學實驗、生科大實驗,榮獲校教師競賽一等獎。
目 錄
實驗一
大腸桿菌的培養(yǎng)及其生長曲線的測定
實驗二
擬南芥的培養(yǎng)與觀察
實驗三秀麗隱桿線蟲的培養(yǎng)與觀察
實驗四
黑腹果蠅的培養(yǎng)與觀察
實驗五
斑馬魚的人工飼養(yǎng)及繁殖
實驗六
小鼠的飼養(yǎng)管理及基本實驗操作
實驗七
質粒的大量提取純化與分析
實驗八
人血液基因組DNA的提取純化與分析
實驗九
擬南芥基因組DNA的提取純化與分析
實驗十
擬南芥葉片總RNA的提取純化與分析
實驗十一
動物細胞總RNA的提取純化與分析
實驗十二
血紅蛋白的提取純化與分析
實驗十三
藻藍蛋白的提取純化與分析
實驗十四
酵母蔗糖酶的提取純化與分析
實驗十五
大蒜超氧化物歧化酶的提取純化與分析
實驗十六 Taq酶的誘導提取純化與分析
實驗十七
紫薯花青素的提取純化及分析
實驗十八
利用熒光標記技術觀察目的蛋白亞細胞定位
實驗十九 DNA芯片技術分析基因組片段拷貝數(shù)差異
實驗二十
熒光實時定量PCR檢測細胞mRNA的表達
實驗二十一
花序侵染法轉化擬南芥
實驗二十二 CRISRR/Cas9技術在敲除細胞目的基因中的應用
實驗二十三 RNA干擾靶基因表達對細胞的影響
實驗二十四
秀麗隱桿線蟲RNA干擾技術
實驗二十五 GST-pull down實驗技術分析相互作用蛋白
實驗二十六
酵母雙雜交技術在研究蛋白質相互作用中的應用
實驗二十七
細菌蛋白質組雙向電泳分析體系的建立
實驗二十八
斑馬魚全胚原位雜交
實驗二十九
利用冷凍切片及免疫熒光技術觀察動物組織結構
實驗三十
利用石蠟切片及免疫組化技術觀察植物組織結構
實驗三十一
電壓門控鈉離子通道膜片鉗實驗
實驗三十二
利用電融合技術構建重組酵母菌株
實驗三十三
酵母細胞的固定化及發(fā)酵特性研究
實驗三十四
基于膠原蛋白的人工皮膚支架制備
實驗三十五
絲素蛋白提取及人工血管的制備
附錄