同濟(jì)博士論叢——擬南芥中RNA指導(dǎo)的DNA甲基化
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DNA甲基化是一個(gè)保守的表觀機(jī)理,在維持基因組穩(wěn)定和器官發(fā)育方面起到非常重要的作用。 《擬南芥中RNA指導(dǎo)的DNA甲基化/同濟(jì)博士論叢》通過實(shí)驗(yàn)得到了部分?jǐn)?shù)據(jù),通過篩選rosl的抑制子,確定了RDM1、RDM3、RDM4是RdDM受體復(fù)合體中的新成員,在連接與沉默復(fù)合體相關(guān)聯(lián)的小RNA功能與先前存在或者重新胞嘧啶甲基化中起到至關(guān)重要的作用。
總序論叢前言前言章 緒論1.1 RNA指導(dǎo)的DNA甲基化1.2 siRNA的產(chǎn)生1.3 DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1.3.1 MET11.3.2 CMT31.3.3 重新甲基化酶DRM及不對(duì)稱甲基化1.3.4 DNA甲基化復(fù)合體第2章 材料與方法2.1 實(shí)驗(yàn)材料2.2 方法2.2.1 植物總DNA的提。–TAB法)2.2.2 植物總RNA提。≧Neasy Plant Mini Kit, QIAGEN)2.2.3 cDNA合成(SuperScript.ⅢFirst-Strand Synthesis System, Invitrogen)2.2.4 感受態(tài)的制備與轉(zhuǎn)化2.2.5 DNA的回收(離心柱型普通瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒QIAGEN)2.2.6 RNA分析2.2.7 DNA甲基化分析2.2.8 6xHis-tagged蛋白質(zhì)純化(Ni - NTA Fast Start Kit,QIAGEN)2.2.9 位點(diǎn)突變(QuikChange Site-Directed Mutagenesis Kit, Stratagene)2.2.10 凝膠阻滯分析(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)2.2.11 免疫共沉淀2.2.12 免疫熒光法和顯微鏡2.2.13 植物染色體蛋白的免疫染色2.2.14 染色質(zhì)免疫沉淀第3章 結(jié)果與分析3.1 通過篩選rosl的抑制子,確定了RDM1是轉(zhuǎn)錄基因沉默途徑中的一個(gè)新成員3.1.1 ROSl:植物中去甲基化酶的發(fā)現(xiàn)……第4章 RDM3和RDM4第5章 結(jié)論與討論