圍繞課題"目的基因原核表達載體的構(gòu)建及目的蛋白的誘導(dǎo)表達和檢測鑒定"探究,開展一系列相關(guān)的分子生物學(xué)實驗,學(xué)生在課題探究的"實戰(zhàn)"過程中掌握分子生物學(xué)技術(shù)、提高發(fā)現(xiàn)問題、分析問題、解決問題的能力、團隊協(xié)作的能力等。
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目錄
前言
實驗室守則 1
實驗內(nèi)容概述 2
實驗一 分子生物學(xué)實驗常用儀器設(shè)備 4
實驗二 培養(yǎng)基的配制與細菌的純化培養(yǎng) 7
實驗三 質(zhì)粒的提取 10
實驗四 目的基因PCR擴增及擴增產(chǎn)物回收 12
實驗五 瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA 16
實驗六 PCR擴增產(chǎn)物與T載體的連接 20
實驗七 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備 24
實驗八 重組質(zhì)粒的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化 26
實驗九 陽性克隆的篩選鑒定 31
實驗十 目的蛋白的誘導(dǎo)表達及檢測 36
實驗十一 蛋白質(zhì)印跡法鑒定目的蛋白 41
實驗十二 細胞中總RNA的提取 44
實驗十三 逆轉(zhuǎn)錄PCR獲取目的基因 47
實驗十四 Dps融合表達載體的構(gòu)建 49
實驗十五 目的基因與融合表達載體重組、Dps融合蛋白誘導(dǎo)表達及檢測 55
實驗十六 目的蛋白的分離純化 58
實驗十七 目的蛋白的功能鑒定 63
參考文獻 68
附錄1 常用試劑及其配制 69
附錄2 常用實驗材料保存方法 80
附錄3 常用儀器設(shè)備使用說明及使用注意事項 81
附錄4 實驗時間安排建議 88
附錄5 實驗小貼士 90
附錄6 實驗報告格式 91