第六章

結核病分子生物學診斷第一節(jié) 分子生物學常用技術

分子生物學診斷方法多基于核酸擴增、雜交和測序等基本技術，其應用于

結核病診斷目前已經(jīng)獲得WHO 認可。目前結核病的分子生物學診斷仍集中在以核酸擴增為核心的檢測技術的應用上，下面將對近幾年應用于結核病診斷的分子生物學技術做詳細闡述。

一、核酸擴增試驗

核酸擴增試驗（nucleic acid amplification tests，NAATs）是通過特異性

地擴增核酸靶序列來檢測結核分枝桿菌，是結核病診斷技術中一種重要而快速的分子診斷工具。美國疾病預防控制中心Centers for Disease Control and

Prevention，CDC）建議所有結核病疑似患者的第一份痰標本均進行NAATs。

目前已經(jīng)通過美國食品和藥物管理局（US Food and Drug Administration，

FDA）認證且應用較廣的試劑盒有Gen-Probe Amplified Mtb Direct test、Roche AmplicorMtb test、COBAS Amplicor、BD-ProbeTec Direct等。一項綜合125項研究的最新文獻顯示：NAATs的總靈敏度和總特異性分別為85%和7%，然而這些研究結果的差異較大，靈敏度在36%～100%，特異性在54%～100％，NAATs的應用受到不同地區(qū)技術水平和儀器設備的制約。

二、Xpert® MTB/RIF

Xpert® MTB/RIF（Cepheid, Sunnyvale, CA）是由美國Cepheid公司研發(fā)出的一款基于實時PCR檢測的快速全自動的核酸擴增技術，可直接進行痰標本檢測，是檢測結核分枝桿菌感染和RIF耐藥基因的、以反應盒為基礎的模塊化平臺。擴增的靶基因為利福平耐藥相關基因的81個堿基對的高突變熱點區(qū)域。Xpert® TB/RIF 技術包括樣本處理、opB基因半巢式實時PCR擴增和

數(shù)據(jù)自動評分共3個步驟。整個過程約2小時，僅需兩步操作，其余均為全自動化檢測，4模塊平臺每8小時工作時間可完成16個樣本。目前最大的全自動 INFINITI® Xpert®平臺具有80個模塊，全天可完成超過1000個樣本。該技術檢測底線為每毫升痰100條細菌。

WHO已于2010年底批準其應用，推薦其為診斷肺結核和耐藥結核病的輔

助手段，并制定了指南。截止2012年7月，2/3的結核病高負擔國家、1/2的耐多藥結核病（multidrug-resistant tuberculosis, MDR-TB）高負擔國家均把Xpert®

MTB/RIF列入國家結核病規(guī)劃指南。由于其用于診斷MDR-TB和合并HIV感染結核病的成本低于傳統(tǒng)方法，很多國家已經(jīng)批準其用于檢測MDR-TB和合并HIV感染的結核病。2013年7月，Xpert® MTB/RIF已通過美國FDA的認證。